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    細胞轉入細胞無血清培養基養要有一個適應過程
    更新時間:2022-12-14   點擊次數:865次
      血清仍是動物細胞培養中最基本的的添加物,尤其是在原代培養或者細胞生長狀況不良時,常常會先使用有血清的培養液進行培養,待細胞生長旺盛以后,再換成無血清培養液。
     
      細胞轉入細胞無血清培養基養要有一個適應過程,一般要逐步降低血清濃度,從10%減少到5%,3%,1%,直至無血清培養。
     
      在降低過程中要注意觀察細胞形態是否發生變化,是否有部分細胞死亡,存活細胞是否還保持原有的功能和生物學特性等。
     
      在實驗后這些細胞一般不再繼續保留,很少有細胞能夠長期培養于無血清培養基而不發生改變的。細胞轉入無血清培養之前,要留有種子細胞,種子細胞按常規培養于含血清的培養基中,以保證細胞的特性不發生變化。
     
      為了使細胞適應無血清培養,關鍵的是使所培養細胞:
     
      1.處于對數生長中期
     
      2.>90% 活細胞率
     
      3.適應時以較高的起始細胞接種
     
      細胞適應無血清培養基的方法
     
      1.直接適應——細胞從添加血清的培養基轉換到無血清培養基(SFM)中。
     
      一些類型細胞可直接從包含血清的培養基適應無血清培養基。對于直接適應,接種細胞密度應該:2.5×10~3.5×10細胞/ml。當細胞密度達到1×10~3×10細胞/ml時,傳代培養細胞。當細胞密度在培養4到7天后達到2×10~4×10細胞/ml時,細胞適應了無血清培養基。每隔3~5天,當細胞密度達到1×10~3×10細胞/ml,細胞活率在90%時,貯備的適應了無血清培養基的細胞培養物應該再次傳代培養。
     
      2.連續適應——分好幾步把細胞從添加血清的培養基轉換到無血清培養基(SFM)中,與直接適應相比較,連續適應趨向對于細胞更加溫和一些。
     
      (1)以2倍正常接種密度接種生長活躍的細胞培養物到75%有血清培養基:25%SFM 混合培養基中,傳代培養。
     
      (2)當細胞密度>5×10細胞/ml時,以2×10到3×10細胞/ml細胞密度,在有血清培養基:SFM為50∶50的混合培養基中傳代培養。
     
      (3)以2×10到3×10細胞/ml細胞密度,25%有血清培養基和75% SFM中傳代培養。
     
      (4)當細胞密度達到1×10到3×10細胞/ml(接種后4到6天),在100%SFM培養基中傳代培養。
     
      (5)每隔3到5天,當細胞密度達到1×10到3×10細胞/ml,細胞活率在90%時,貯備的適應了無血清培養基的細胞培養物應該再次傳代培養。

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